Jak vytvořit TAE vyrovnávací paměť v několika krocích

TAE pufr je roztok tvořený bází Tris, kyselinou octovou a EDTA (Tris-acetát-EDTA). Je to historicky nejběžnější pufr používaný pro elektroforézu na agarosovém gelu při analýzách produktů DNA, které jsou výsledkem amplifikace PCR, protokolů čištění DNA nebo pokusů o klonování DNA.

Tento buffer má nízkou iontovou sílu a nízkou vyrovnávací paměť. Je nejvhodnější pro elektroforézu velkých (> 20 kb) kusů DNA a bude třeba je často vyměňovat nebo recirkulovat na delší (> 4 h) dobu běhu gelu.

S ohledem na to možná budete chtít zvážit několik šarží vyrovnávací paměti.

Vzhledem k tomu, že je vyrovnávací paměť snadná a kroky lze provést rychle, dělat více než jednu dávku najednou by nemělo být obzvláště časově náročné nebo obtížné vytáhnout. Při použití níže uvedených pokynů by mělo trvat vyrovnávací paměť TAE pouhých 30 minut. Zde je postup:

Připravte zásobní roztok EDTA

Předem se připraví roztok EDTA (ethylendiamintetraoctové kyseliny). EDTA do roztoku úplně nezačne, dokud se hodnota pH nezmění na hodnotu přibližně 8. Pro 500 ml zásobního roztoku 0,5 M EDTA zvážíme 93,05 g disodné soli EDTA (FW = 372,2 ). Rozpusťte v deionizované vodě o objemu 400 ml a upravte pH hydroxidem sodným (NaOH). Roztok doplňte na konečný objem 500 mililitrů.

Získejte zásobní roztok TAE

Vytvořte koncentrovaný (50x) zásobní roztok TAE tak, že zvážíte 242 gramů baze Tris (FW = 121,14) a rozpusťte ji přibližně 750 mililitry deionizované vody.

Opatrně přidejte 57 ml 1 ml ledové kyseliny a 100 ml 0,5 M EDTA (pH 8,0). Potom upravte roztok na konečný objem 1 litr. Tento zásobní roztok lze skladovat při pokojové teplotě. Hodnota pH tohoto pufru není nastavena a měla by být kolem 8. 5.

Připravte pracovní roztok TAE

Pracovní roztok 1x TAE pufru je vyroben jednoduše zředěním zásobního roztoku 50x v deionizované vodě.

Konečné koncentrace solutu jsou 40 mM. Tris-acetát a 1 mM EDTA. Pufr je nyní připraven k použití při běhu agarózového gelu.

Co potřebujete pro vyrovnávací paměť

Protože vytváření vyrovnávací paměti TAE vyžaduje pouze rychlou a jednoduchou sadu instrukcí, množství potřebných materiálů není příliš vysoké. Budete potřebovat pouze disodnou sůl EDTA, bázi Tris a ledovou kyselinu octovou.

Vytvoření vyrovnávací paměti také vyžaduje pH metr a kalibrační standardy. Budete také potřebovat kádinky nebo lahve o objemu 600 mililitrů a 1500 mililitrů, stejně jako odměrné lahve. Konečně budete potřebovat deionizovanou vodu, míchací tyčinky a míchat talíře.

Obal

Kde plánujete vytvořit vyrovnávací paměť - na školním pracovišti, na pracovišti nebo na jiném místě, jako je váš domov?Před zahájením kontroly ujistěte se, že máte všechny výše uvedené materiály pro buffer TAE.

Pokud byste raději nemuseli platit za materiály, doporučuje se udělat buffer mimo váš domov. Můžete snadno objednat materiály, které potřebujete online nebo navštívit specializovaný obchod pro ně.