Jak připravit pufrovaný fyziologický roztok (PBS)

PBS (fosfátový pufrovaný fyziologický roztok) je běžně používaný pufr pro imunohistochemické barvení a běžně se používá v biologickém výzkumu. Koncentrace osmolarity a iontů roztoků odpovídají koncentraci lidského těla (izotonické).

PBS je roztok soli na bázi vody obsahující hydrogenfosforečnan sodný, chlorid sodný a v některých případech chlorid draselný a dihydrogenfosforečnan draselný.

Imuno fluorescenční barvení pro IHC

Imunofluorescenční barvení byla první imunohistochemická (IHC) barvicí metoda. Při zásadité reakci vazby antigen-protilátka jsou antigeny viditelné pomocí fluorescenčních barviv při konjugaci s protilátkami. Proces se děje, když je aktivován vzrušujícím světlem specifické vlnové délky pod fluorescenčním mikroskopem. Imunohistochemie se týká procesu detekce antigenů (například proteinů) v buňkách tkáňového úseku za použití principu protilátek, které se specificky váží na antigeny v biologických tkáních.

Použití fosfátového pufrovaného fyziologického roztoku (PBS)

Fosfátový pufrovaný fyziologický roztok má mnoho použití, protože je pro většinu buněk izotonický a netoxický. Lze jej použít ke zředění látek a používá se k opláchnutí nádob obsahujících buňky. PBS se může použít jako ředidlo v metodách pro sušení biomolekul, protože molekuly vody v něm budou strukturovány kolem látky (například bílkoviny), aby byly "vysušené" a imobilizovány na pevný povrch.

Tenký film vody, který se váže na látku, zabraňuje denaturaci nebo jiným změnám konformace. Uhlíkové pufry mohou být použity pro stejný účel, ale s menší účinností. PBS může být také použit pro získání referenčního spektra při měření adsorpce proteinu v elipsometrii.

Příprava PBS

Existuje mnoho různých způsobů přípravy PBS.

Některé vzorce neobsahují draslík, zatímco jiné obsahují vápník nebo hořčík. Nízký recept, který je relativně snadný, je pro 10X zásobní roztok PBS (0,1M). K dispozici je také možnost přidat Tween. Celý proces trvá asi 10 minut.

Jak vyrobit fyziologický roztok pufrovaný fosfátem (PBS)

Zvažte: 10,9 g bezvodého hydrogenfosforečnanu sodného (Na2HPO4), 3,2 g bezvodého monohydrát dihydrogenfosforečnanu sodného (NaH2PO4) a 90 g chloridu sodného (NaCl).

1. Vše, co bylo uvedeno výše, rozpusťte v těsně pod 1 litru destilované vody.
2. Upravte hodnotu pH na hodnotu 7. 4.
3. Proveďte řešení až do konečného objemu 1L.
4. (nepovinné) Pro roztok obsahující 0,5% Tween 20 přidejte 5 ml Tween 20 do roztoku 1 l.
5. Před použitím zředit 10X a v případě potřeby upravit pH.
6. Tipy pro tvorbu vyrovnávacího roztoku PBS

Uchovávejte při pokojové teplotě.

• Bezvodé reagencie mohou být nahrazeny, ale budete muset přepočítat odpovídající množství každé z nich, aby se přizpůsobily přidané molekuly vody.
• Co potřebujete k tvorbě PBS pufru

Hydrogenfosforečnan sodný (bezvodý)

• Hydrogenfosforečnan sodný (bezvodý)
• Chlorid sodný
• Měřící a vážící lodě
• > sonda pH, kalibrovaná a vhodné roztoky pro nastavení pH
• odměrná baňka o objemu 1 l
• Tween 20 (volitelně)