Jak se bakteriální kultura (lyofilizace)

Sušení mrazem, také nazývané lyofilizace nebo kryoezikace, je proces odstraňování vody z produktu poté, co je zmrazen (a poté umístěn pod vakuum) umožňující změnu ledu z pevné látky na páru, aniž by prošel kapalnou fází. Ledem (nebo jinými zmrzlými rozpouštědly) se produkt odstraní procesem sublimace a molekuly vodní vody se odstraní procesem desorpce.

Základy lyofilizace

Jedním z nejlepších způsobů uchovávání bakteriální, houbové, kvasinkové nebo jiné kultury mikroorganismů po dlouhou dobu je použití procesu lyofilizace. Tento krátký laboratorní postup lze provést s jakýmkoli běžně dostupným lyofilizátorem, který zachová vaši kulturní sbírku. Vzhledem k tomu, že lyofilizace je nejsložitější a nejdražší forma sušení, je proces obvykle omezen na jemné, tepelně citlivé materiály vysoké hodnoty. Látky, které nejsou mrazem poškozeny, mohou být obvykle lyofilizovány, takže skladování v chladničce není zbytečné.

Tento proces může trvat necelé tři hodiny a až 24 hodin, bez doby růstu kultury.

1. Krok za krokem lyofilizace

2. Za prvé, rostou přes noc kultivaci nebo trávník mikroorganismu na LB nebo jiném vhodném nutričním agaru.

   Dále připravte sterilní lahvičky se zátkovým uzávěrem v autoklávu předem, s uzávěry (gumovými zátkami) volně položenými nahoře. Umístěte papírové etikety vytištěné s identifikací kultury uvnitř trubek před autoklávováním. Případně použijte trubice s uzávěry určenými pro sterilitu.

4. Do destičky se přidá 4 ml lyofilizačního pufru. V případě potřeby mohou být buňky zavěšeny pomocí sterilní skleněné tyčinky.

5. Rychle přeneste kultivační suspenzi do sterilovaných lahviček. Přidejte přibližně 1,5 ml na jednu lahvičku. Utěsněte gumovou čepičkou.

6. Zmrazte suspenzi kultury uvnitř lahviček umístěním lahviček do mrazničky s teplotou -20 stupňů Celcius.

7. Jakmile jsou kultury zmrazeny, připravte lyofilizátor jeho zapnutím a nechte stabilizovat vhodnou teplotu a podmínky vakua. Postupujte podle pokynů výrobce pro konkrétní značku lyofilizéru, kterou používáte.

8. Opatrně a asepticky umístěte víčka lahviček volně na vrchní části lahviček, aby během procesu lyofilizace mohla uniknout vlhkost a umístěte lahvičky do komory s lyofilizátorem. Aplikujte podtlak na komoru podle pokynů výrobce.

9. Doba kultivace nechte zcela lyofilizovat (vyschnout). To může trvat od několika hodin až přes noc v závislosti na objemu každého vzorku a kolik vzorků máte.

10. Odstraňte vzorky z komory vymrazovače podle pokynů výrobce a okamžitě utěsněte injekční lahvičky s gumovými kryty a poté s lisovacími deskami.

Sběr lyofilizované kultury se uskladní při pokojové teplotě.

• Výrobky, které budete potřebovat
• Mrazící sušička
• Nutriční nebo jiné vhodné agarové desky (a inkubátor pro růst kultury)
• Skleněná tyčinka
• Lyofilizační pufr
• (a krycí šňůra pro použití čepic)

_{Mraznička
Odkaz:}

SP Scientific. Základní principy lyofilizace. // www. spscientific. sušení lyofilizací / základy /